1.范围
本标准规定了食品中致泻大肠埃希氏菌( diarrheagenic escherichia coli)的检验方法。
本标准适用于食品中致泻大肠埃希氏菌的检验。
2.术语和定义、缩略语
2.1 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
2.1.1 致泻大肠埃希氏菌 Diarrheagenic escherichia coli
一类能引起人体以腹泻症状为主的大肠埃希氏菌,可经过污染食物引起人类发病。常见的致泻大肠埃希氏菌主要包括肠道致病性大肠埃希氏菌、肠道侵袭性大肠埃希氏菌、产肠毒素大肠埃希氏菌、产志贺毒素大肠埃希氏菌(包括肠道出血性大肠埃希氏菌)和肠道集聚性大肠埃希氏菌。
2.1.2 肠道致病性大肠埃希氏菌 Enteropathogenic Escherichia coli
能够引起宿主肠黏膜上皮细胞黏附及擦拭性损伤,且不产生志贺毒素的大肠埃希氏菌。该菌是婴幼儿腹泻的主要病原菌,有高度传染性,严重者可致死。
2.1.3 肠道侵袭性大肠埃希氏菌 Enteroinvasive Escherichia coli
能够侵入肠道上皮细胞而引起痢疾样腹泻的大肠埃希氏菌。该菌无动力、不发生赖氨酸脱羧反应、不发酵乳糖,生化反应和抗原结构均近似痢疾志贺氏菌。侵入上皮细胞的关键基因是侵袭性质粒上的抗原编码基因及其调控基因,如iaH基因、ipaR基因(又称为invE基因)。
2.1.4 产肠毒素大肠埃希氏菌 Enterotoxigenic escherichia coli
能够分泌热稳定性肠毒素或/和热不稳定性肠毒素的大肠埃希氏菌。该菌可引起婴幼儿和旅游者腹泻,一般呈轻度水样腹泻,也可呈严重的霍乱样症状,低热或不发热。腹泻常为自限性,一般2d～3d即自愈。
2.1.5 产志贺毒素大肠埃希氏菌 Shiga toxin-producing Escherichia coli(肠道出血性大肠埃希氏菌 Enterohemorrhagic Escherichia coli)
能够分泌志贺毒素、引起宿主肠黏膜上皮细胞黏附及擦拭性损伤的大肠埃希氏菌。有些产志贺毒素大肠埃希氏菌在临床上引起人类岀血性结肠炎(HC或血性腹泻,并可进一步发展为溶血性尿毒综合征(HUS),这类产志贺毒素大肠埃希氏菌为肠道出血性大肠埃希氏菌。
2.1.6 肠道集聚性大肠埃希氏菌 Enteroaggregative escherichia coli
肠道集聚性大肠埃希氏菌不侵入肠道上皮细胞,但能引起肠道液体蓄积。不产生热稳定性肠毒素或热不稳定性肠毒素,也不产生志贺毒素。唯一特征是能对Hep-Σ细胞形成集聚性黏附,也称Hep-2细胞黏附性大肠埃希氏菌。
2.2 缩略语
下列缩略语适用于本文件。
2.2.1 DEC:致泻大肠埃希氏菌 Diarrheagenic Escherichia coli
2.2.2 EPEC:肠道致病性大肠埃希氏菌 Enteropathogenic Escherichia coli
2.2.3 EIEC:肠道侵袭性大肠埃希氏菌 Enteroinvasive escherichia coli
2.2.4 ETEC:产肠毒素大肠埃希氏菌 Enterotoxigenic Escherichia coli
2.2.5 STEC:产志贺毒素大肠埃希氏菌 Shiga toxin-producing Escherichia coli
2.2.6 EHEC:肠道出血性大肠埃希氏菌 Enterohemorrhagic Escherichia coli
2.2.7 EAEC:肠道集聚性大肠埃希氏菌 Enteroaggregative Escherichia coli
2.2.8 escV:蛋白分泌物调节基因, gene encoding lee-encoded typeⅢ secretion system factor
2.2.9 eae:紧密素基因, gene encoding intimin for Escherichia coli attaching and effacing
2.2.10 bfpB:束状菌毛B基因, bundle- forming pilus B;
2.2.11 stx1:志贺毒素I基因, Shiga toxin one
2.2.12 stx2:志贺毒素Ⅱ基因, Shiga toxin two
2.2.13 lt:热不稳定性肠毒素基因,heat- labile enterotoxin
2.2.14 st:热稳定性肠毒素基因, heat-stable enterotoxin
2.2.15 stp(stla):猪源热稳定性肠毒素基因,heat- stable enterotoxins initially discovered in the Isolates from pigs
2.2.16 sth(stb):人源热稳定性肠毒素基因,heat- stable enterotoxins initially discovered in the isolates from human
2.2.17 inE:侵袭性质粒调节基因, invasive plasmid regulator
2.2.18 ipaH:侵袭性质粒抗原H基因, invasive plasmid antigen H-gene
2.2.19 aggR:集聚黏附菌毛调节基因,aggregative adhesive fimbriae regulator
2.2.20 uidA:B葡萄糖苷酶基因,β glucuronidase gene
2.2.21 astA:集聚热稳定性毒素A基因, enteroaggregative heat- stable enterotoxin A
2.2.22 pic:肠定植因子基因, protein involved in intestinal colonization
2.2.23 LEE:肠细胞损伤基因座, Locus of enterocyte effacement
2.2.24 EAF:EPEC黏附因子, EPEC adhesive factor
3.设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:
3.1 恒温培养箱:36℃±1℃,42℃±1℃。
3.2 冰箱:2℃～5℃。
3.3 恒温水浴箱:50℃±1℃,100℃或适配1.5mL或2.0mL金属浴(95℃～100℃)
3.4 电子天平:感量为0.1g和0.01g。
3.5 显微镜:10×～100×。
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